دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac

اختصاصی از فی لوو دانلود مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

مشخصات این فایل
عنوان:بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac
فرمت فایل: word(قابل ویرایش)
تعداد صفحات:62

این مقاله در مورد بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac می باشد.

 

بخشی از تیترها به همراه مختصری از توضیحات هر تیتر از مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac

- آگارز MP
3- تانک الکتروفورز افقی
روش:
ابتدا آگارز MP در بافر TBE(0.5x) را بکمک حرارت حل کرده و ژل آگارز افقی را سینی مخصوص تانک الکتروفورز افقی تهیه می نمائیم. سپس به مقدار Ml5 از DNA کروموزومی را در چلهک ژل ساخته شده ریخته و در تانک الکتروفورز حاوی بافر TBE(0.5x) پس از برقراری جریان الکتریکی مستقیم الکتروفورز می کنیم....(ادامه دارد)

روش تهیه Competent Cell
100 میلی لیتر از محیط SOB را در یک ارلن یک لیتری تهیه کرده و اتوکلاو می نمائیم. به محیط فوق 1 میلی لیتر از کشت 18 ساعت
) E.col.(DH5را تلقیح می نمائیم. ارلن را برروی شبکه قرار داده و با دور rpm200 در دمای ⁰C37 قرار داده تا OD₅₅₀nm به حدود 5/0 برسد. ارلن محتوی باکتری را بمدت نیم ساعت در یخ قرار داده و پس از آن بندت 10 دقیقه در دمای ⁰C4 در rpm1800 سانتریفوژ می کنیم....(ادامه دارد)

- غربالگری
باکتریهای رشد یافته پس از ترانسفورماسیون در محییط نوترین برات آنتی بیوتیک کشت داده و پس از حدود 18 ساعت که کدورت محیط مناسب شد، پلامیت آنها را تخلیص می کنیم. پلاسمیدهیا تخلیص شده را برروی ژل آگارز 1% بررسی می نمائیم. پلاسمیدهائی که حاوی ژن مورد نظر باشند، حرکت...(ادامه دارد)

- خالص سازی پروتئین L₇/L₁₂ با استفاده از Ni:NTA:
جداسازی پروتئینهای دارای دنباله 6 اسید آمینه هیستیدین با استفاده از تکنولوژی Ni-NTA براساس کروماتوگرافی تمایلی انجام می گردد. نیتروتری استیک اسید (Nitrilo triacotic Acid) NTA دارای 2 جایگاه آزاد برای میان کنش با 6 his-tag میباشد. NTA به یونهای فلزی مانند Ni²⁺ با پایداری بالایی مکتصل شده و شرایط سخت شستشو نیز موجب جداشدن یونها از آن نمی گردد....(ادامه دارد)

- دیالز پروتئین:
از سیستم دیالیز برای تعویض بافر پروتئینهای خالص شده استفاده میشود. بدین منظور پروتئین از یک غشاء نیمه تراوا دارای منافذی با اندازه های مناسب عبور داده میشود. در این مرحله سلولهایی که بزرگتر از منافذ غشاء هستند، داخل کیسه دیالیز باقیمانده و پروتئینهای کوچکتر و یونها از غشاء عبور کرده و وارد فضای بیرون کیسه دیالیز میشوند.

بخشی از فهرست مطالب مقاله بررسی ایمنی زایی ژن های L7/L12 و P39 در موش های Balac در پایین آمده است.

-جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:
2- آگارز MP
3- تانک الکتروفورز افقی
روش:
-تائید ژنوم سنتز شده توسط PCR:
-کلونینگ ژنهای L7/L12 و P39 در کلونینگ pSK+:
-هضم آنزمی پلاسمید sPK:
-هضم آنزیمی ژنهای L7/L12 و P39:
ترانسفورماسیون
-غربالگری
...(ادامه دارد)

دانلود تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac

اختصاصی از فی لوو دانلود تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم. پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند. بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است:

1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را دور می ریزیم.

2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم. سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.

3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در  0C65 انکوبه می کنیم.

4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم. محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.

5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.

هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac است. بنابراین پس از جداسازی و تکثیر ژنهای فوق مراحل زیر در این تحقیق انجام گرفت.

1- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector

2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12

3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector

4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39

5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector

6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین

7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C

8- سنجشهای ایمونولوژیک

شامل 61 صفحه فایل word